探究白芨组织培养的最适培养基
发布者：admin 发布时间：2016-09-10 10:57:00
探究白芨组织培养的最适培养基
白芨为兰科草本球根植物，又名紫兰、连及草、甘根、白给，植株高18-60厘米。白芨的初生假鳞茎是圆球形，生长到一定程度才形成V字形块状假鳞茎。叶4-6枚，狭长圆形或披针形，长8-29厘米，宽1.5-4厘米，先端渐尖，基部收狭成鞘并抱茎。白芨喜凉爽气候及腐殖质丰富而排水良好的砂壤土，半阳地也可栽培，但干旱、高温，会使叶片枯萎黄。3月下旬萌芽，霜后地上枝叶枯萎，白芨的花粉呈块状不易散开，所以在授粉上也不是很有利。白芨的种子极细小，似粉末，状没有胚乳，只有几个细胞构成的发育不完全的胚，种子萌发率极低 ,且自然繁殖困难 ,所以野生资源较稀少 ,是我国的一种珍稀濒危的保护植物。白芨属有九个种类，产于中国的就有四种，白芨在我国长江流域及以南地区均有分布，生长区域较广。由于多年的掠夺式采挖，加上生境日恶化，使得野生白芨的数量急剧减少，濒临灭绝边缘。白芨的主要化学成分是联苄类、菲类及其衍生物,此外,还含有少量挥发油,粘液质,白及甘露聚糖以及淀粉(30.5%),葡萄糖 (1.5%)等。最近几年,对白及的化学成分研究主要集中在联苄类、二氢菲类和联菲类化合物上,并从中分离鉴定出一系列新的联苄、二氢菲和联菲化合物。白芨具有收敛止血、清热解毒、消肿生肌之功效。随着我国中医药事业的发展，白芨在临床上的应用范围不断扩大，白芨的用药需求急剧增加。但白芨种子在自然条件下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难，仅靠分株繁殖，周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。白芨正面临着资源难以满足市场的严峻现实。
本试验采用白芨种子为材料，利用组织培养方法进行无性繁殖，旨在为实现白芨种苗的规模化生产提供快速扩繁技术支持。
实验目的:
通过不同的基本培养基，不同激素浓度配比、有机物浓度等对白芨组织快繁的影响。筛选得到白芨组织培养的最佳培养基配方,建立白芨组织快繁体系。
实验方法：
以MS或1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的激素，有机添加剂等，观察白芨种子的萌发，增殖，生根情况，找出最佳培养基配方。
材料：
人工栽培的白芨成熟未开裂蒴果
实验用具及药品：
超净工作台、高压灭菌锅、光照培养箱、镊子、滤纸、无菌水、乙醇、升汞、MS培养基，1/2MS培养基、萘乙酸（NAA）、细胞分裂素（6-BA）、KT、IBA、土豆、活性炭、蔗糖等。
实验步骤：
1， 配制培养基(各1L)
以下培养基均加入6.8-7.5g/L琼脂粉，Ph5.6- 5．8，高压灭菌锅中l2l℃下灭菌20min。
1.种子萌发培养基：
|
标号 |
基础培养基 |
6-BA (mg/l) |
NAA (mg/l) |
2,4-D (mg/l) |
KT (mg/l) |
IBA (mg/l) |
活性碳 (g/l) |
土豆 （g/l） |
蔗糖 （g/l） |
|
1 |
MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
2 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
3 |
1/5MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
4 |
MS |
0.1 |
1.0 |
|
|
|
2 |
|
40 |
|
5 |
MS |
0.1 |
1.0 |
|
|
|
2 |
|
30 |
|
6 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
0.1 |
|
|
|
30 |
|
7 |
1/2MS |
|
0.5 |
|
0.1 |
|
|
|
30 |
|
8 |
1/2MS |
0.5 |
0.5 |
|
|
|
|
|
30 |
|
9 |
1/2MS |
0.5 |
|
0.5 |
|
|
|
|
30 |
|
10 |
MS |
|
1.0 |
|
|
0.1 |
|
|
30 |
|
11 |
1/2MS |
|
1.0 |
0.3 |
|
0.2 |
|
|
30 |
|
12 |
1/2MS |
0.1 |
|
|
0.5 |
0.1 |
|
|
30 |
|
13 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
30 |
30 |
|
14 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
40 |
30 |
2.增殖培养基：
<|
标号 |
基础培养基 |
6-BA (mg/l) |
NAA (mg/l) |
2,4-D (mg/l) |
KT (mg/l) |
IBA (mg/l) |
活性碳 (g/l) |
土豆 （g/l） |
蔗糖 （g/l） |
|
1 |
MS |
1.0 |
0.1 |
|
|
|
|
|
30 |
|
2 |
MS |
1.0 |
|
0.5 |
|
|
|
|
30 |
|
3 |
MS |
1.0 |
0.5 |
|
1.0 |
|
|
|
30 |
|
4 |
MS |
1.0 |
0.5 |
|
|
0.5 |
|
|
30 |
|
5 |
1/2MS |
1.0 |
0.1 |
|
|
|
|
|
30 |
|
6 |
1/2MS |
|
|
0.5 |
1.0 |
|
|
|
30 |
|
7 |
1/2MS |
1.0 |
|
0.5 |
|
|
1.0 |
|
30 |
|
8 |
1/2MS |
0.8 |
|
